Detaljert forklaring av reagensvolatilisering i PCR -eksperimenter

Detaljert forklaring av reagensvolumisering i PCR -eksperimenter.

I PCR -eksperimentet, etter å ha tilsatt reaksjonssystemet, dekker vi lokket forsiktig og bekrefter gjentatte ganger at lokket er lukket for å unngå reagensvolatilisering. Men noen ganger er vi også i tvil: vi har bekreftet at lokket er tett lukket, men etter at eksperimentet er fullført, vil reagenset fortsatt fordampe. hva er grunnen?

Faktisk er reagensvolatilisering et av de vanligste problemene i PCR -eksperimenter, og det er mange faktorer som påvirker reagensvolumisering.

Fordamping refererer til at under PCR -eksperimentet fordamper reaksjonsoppløsningen ved høy temperatur, og kondenserer deretter på flaskeveggen eller toppdekselet for å danne vanntåke eller vanndråper, eller strømmer direkte fra luftgapet på flaskehetten eller filmen, som resulterer I en endring i konsentrasjonen av reaksjonsløsningen. Endringer, mengden reaksjonsløsning avtok, og noen fordampet til og med til tørrhet, noe som resulterte i ugyldige eksperimenter.

1. Varmt lokktrykk, temperatur

I PCR -eksperimenter varmer vi vanligvis lokket for å forhindre kondens av reagensdamp. Temperaturen på det oppvarmede lokket er vanligvis høyere enn reaksjonsløsningen for å forhindre kondens av damper.

Termiske syklervarme lokk kan grovt deles inn i følgende fire typer: ikke-justerbare oppvarmingslokk, justerbare oppvarmingslokk, adaptive oppvarmingslokk og automatiske oppvarmingslokk. Justerbar oppvarmet lokk har fingertett komprimering. Hvis ikke strammes tett, vil reagenser fordampe. Fordamping av kant kan minimeres ved å øke trykket på det oppvarmede lokket. Noen ganger kan strammen klype røret og vri knotten. Under normale omstendigheter kan det elektriske smarte oppvarmingsdekselet automatisk oppdage forbruksvarer i forskjellige høyder, komprimerer automatisk forbruksvarer, og trykket er jevnt og konstant, og dermed redusere fordampning av reagens og manuelle feil, og forbedre eksperimentell nøyaktighet og repeterbarhet.

2. Deformasjon av forbruksvarer

For damplekkasjer tror de fleste at det varme lokketrykket ikke er nok. Trykket på det varme lokket er veldig viktig, men det er bare ett aspekt. Faktisk er forbruksvarer også veldig viktige.

PCR -åpningsplater er vanligvis laget av plastmaterialer, som utvides og deformerer sterkt etter å ha blitt oppvarmet. Den termiske ekspansjonshastigheten til PCR -metallbasen som brukes til å plassere PCR -åpningsplaten er ekstremt lav, og PCR -åpningsplaten kan ikke utvide seg normalt langs planet etter termisk ekspansjon. Den svulmende tilstanden gjør at det øverste varmedekselet ikke kan kontakte overflaten på PCR -åpningsplaten fullt ut, noe som resulterer i ujevn temperatur og trykk, forårsaker fordampning av reagens ved kanten av PCR -åpningsplaten og påvirker PCR -deteksjonseffekten.

3. Forbruksvarer er ikke tett forseglet

Tettheten til det termiske lokket og forbruksvarene betyr ikke at PCR -røret er tett lukket, og kvaliteten på PCR -brønnplaten er ujevn. Forbruksvarer av høy kvalitet, overflaten på dysen og dekselet er glatt, og tetningen bak boksedekselet er bra, og det er ikke lett å lekke. Underordnede forbruksvarer har ujevne tuter og radielle linjer, noe som lett kan forårsake lekkasje eller til og med tørke ut.

I PCR-eksperimenter, prøv å velge høykvalitets og passende forbruksvarer. Samtidig kan reaksjonssystemet utvides for å minimere påvirkningen av systemfordamping på reaksjonen.