Tetnings- og forurensningsproblemer i multiwell cellekulturplater

Lasting og håndtering av cellekulturplater med flere brønner:

Cellekulturplaten følger også prinsippet om strenge asepsis når du utfører celledrift. Alle operasjoner må være standardisert og vitenskapelig, og vil ikke forårsake ytterligere innvirkning på celleveksten. Det vanligste problemet er hvordan man kan sikre ensartetheten av cellene etter å ha tilsatt prøven og minimerer virkningen av å endre mediet på veksttilstanden til cellene.

spørre:
Lokkene i 96 og 24-brønns kulturplater eller petriskåler er veldig løse, noe som er praktisk for ventilasjon, men vil bakterier, mugg og andre miljøgifter også gli inn?

svar:
Lokket er veldig løst, som tilhører semi-open kultur, og formålet med dette er å ventilere (faktisk er det å gjøre CO2 utenfor kulturrett medium).
Alt har fordeler og ulemper, noe som selvfølgelig øker muligheten for forurensning. I tillegg får dette væsken i parabolen til å fordampe, noe som er kjent for presis dosering av medisiner. Derfor er følgende to tiltak nødvendige: a. Luften i inkubatoren må være ren (vanlig ultrafiolett lys, alkoholskrubbing, og inkubatoren skal åpnes og lukkes så lite som mulig) b. Fuktigheten i inkubatoren må alltid holdes på 100% (vasken med sterilt destillert vann plassert i inkubatoren).
Akkurat som en petriskål, er den også en beholder med et opp-ned lokket, og det vil ikke bli forurenset. Hovedsakelig på grunn av det negative trykket fra luftstrømmen generert av "L" kanten av dekselet, er det mikroorganismer festet til støvet, og støvet som bæres av luftstrømmen kan ikke passere gjennom kanten av dekselet som genererer undertrykk. Ventilasjonseffekten er bare gjennom diffusjon av luft, og ingen luftstrøm vil bli generert, så den vil bare puste og ikke trenge gjennom bakterier.

spørre:
Ved hjelp av en 24-brønners plate er det operasjoner i noen av brønnene (i den ultra-rene benken), og det er celler som skal dyrkes i andre brønner. Jeg er bekymret for at dette vil forårsake forurensning. Jeg vet ikke hva jeg skal ta hensyn til?

svar:
Hvis operasjonen er standardisert i den ultra-rene benken, skal den være OK. Jeg tror du kan gjøre full bruk av dekselet til kulturplaten, prøve å avsløre bare hullene som skal betjenes, og dekke de andre hullene med deksler.
Vurder omfattende før bruk og utnytt full bruk av alle hullene; Hvis du bare trenger å bruke noen få hull, kan du bare bruke den ene siden, og dekke resten med et deksel. Jeg er vant til å bruke høyre hull først (det er praktisk å legge til prøver til høyre).

Når du bruker noen få glassglass for å heve den ene siden av brettet, ikke åpne dekselet helt, generelt ikke noe problem.
Ujevn cellefordeling og løsninger

spørre:
Cellene blir inokulert på kulturplaten, og cellene samles alltid i den perifere delen, hvordan skal de takle den?

svar:
Kan jeg spørre hvordan cellene dine er blandet? Er det pipettering eller rister kulturplaten? Hvis det er sistnevnte, og hvis det er rystet i en sirkel, er det veldig sannsynlig at cellene vil bli kastet til den perifere delen på grunn av sentrifugalkraften, noe som resulterer i færre celler i midten. Mer enn fire uker!
Her er en god måte: Før du dyrker frøplaten, legg kulturplaten i inkubatoren i noen timers metning og ta den ut. Kraften skal være lett når du planter cellene. Å legge sakte lar cellesuspensjonen strømme inn i brønnene på platen, og de dyrkede cellene vokser i utgangspunktet jevnt. Husk å aldri riste med en shaker, ellers vil cellene dine klumpe seg sammen som du sa.
Jo mindre hulldiameter på kulturplaten, desto mer åpenbar er dette fenomenet. Dette fenomenet er uunngåelig for plater med 24 og 96-brønner, fordi væsken fester seg til veggen slik at kulturløsningen i brønnen ikke danner et væskenivå, men periferien er høy, akkurat som et konkav speil. Når du bruker disse to typene åpningsplater, er det imidlertid ikke mulig å legge til tilstrekkelig mengde kulturløsning på grunn av behovet for ytterligere inngrep, slik at cellene vil vises "Edge Collection" sammen med kulturløsningen. Det avhenger av hvilke indikatorer du trenger å observere. Hvis det er MTT, vil immunhistokjemi påvirke resultatene på grunn av cellesjagdeling.
Når du fordøyer celler, må du ta hensyn til pipettering jevnt for å unngå celleklumper, og mengden kulturløsning i brønnen skal være tilstrekkelig. Generelt, tilsett nok kulturløsning når du inokulerer, og endre løsningen en gang når du legger til intervensjon. Mengden kulturløsning som er lagt til intervensjonsløsningen er lik mengden kulturløsning på inokuleringstidspunktet, i dette tilfellet vil fenomenet "Edge Set" bli forbedret, slik at du like gjerne kan prøve det.

spørre:
Det jeg gjorde var plakkformasjonseksperimentet. Det er best å spre cellene i et enhetlig lag. De fleste av hullene er fine når viruset er inokulert, og noen av dem er ikke ensartede. Det er store forskjeller i cellegruppen. Jeg vil gjerne spørre deg hvilken metode du bruker når du legger til celler?

svar:
Det er viktig å pipette cellene til en encellesuspensjon etter fordøyelsen! Forsikre deg om at antall celler i hver brønn er konsistent når du deler platen!
Selvfølgelig er det også behandlingsfaktorer. Parallellismen mellom brønnene er også veldig viktig. For eksempel, når du tilsetter medisin, bland medisinen etter fortynning for å sikre at konsentrasjonen av hver brønn er konsistent!
Videre, når du tilsetter celler og medisiner, bør testgruppen og kontrollgruppen tilsettes i sin tur for å unngå forskjellen i celletetthet og medikamentkonsentrasjon forårsaket av sekvensen av tilsetning av prøver!

spørre:
Blåsingen er allerede ensartet, men planken, 6 hull og 24 hull er alltid noe ujevn og litt konsentrert i midten. Dessuten er det åpenbart at tellingen er gjort, og etter en dag eller to er tettheten til hvert hull forskjellig, noe som vil påvirke deteksjonen. Er det en god måte?

svar:
Hvis du bruker en pasteurpipette, ikke suger du for mye hver gang, fordi cellene i pipetten automatisk vil synke, ofte er antall celler i de første hullene stort, og cellesuspensjonen er ofte ensartet, og væsken vil Følg S-form-ruten.
Hvis du bruker en pipette, bør tipsene behandles og fjernes for å unngå å skade cellene, slik at hver gang væsken tas tilsvarer en brønn. Det er mer nøyaktig å legge til en-til-en-hull med spiss. Men vær også oppmerksom på å blande suspensjonen.

For å sette opp en parallell gruppe, må N være stor nok (du kan beregne den).

Ikke rist etter plettering, da risting vil føre til at celler samles mot sentrum. Det er best å planke en gang.

Porøs cellekulturplate Yongyue Medical har alltid betraktet kvalitetskontroll som foretakets levetid, og forfulgt den kontinuerlige forbedringen av bedriftens konkurranseevne. Selskapet holder seg alltid til bedriftens ånd av å overholde lover og forskrifter, være streng med selvdisiplin, være mild og våge å ta ansvar som standard i drift, opprettholde og utvide markedet med utmerket kvalitet og utmerket service, og møte den behov for kunder i størst grad. . Vinn-vinn med kunder er vårt utviklingsmål. Yongyue Medical! Din pålitelige partner. Vi er villige til å samarbeide oppriktig med deg for å skape en bedre fremtid.